## 下一代全基因组人源化小鼠构建技术

尊龙凯时在传统ES打靶技术的基础上，研发了TurboKnockout®基因编辑技术，这是一个升级版的技术，利用优化的纯合ES克隆打靶体系，能够筛选出基因敲除、敲入和点突变的纯合ES细胞。该技术融合了囊胚前注射和四倍体补偿技术，通过显微注射确保产生的创始小鼠达到100%的嵌合状态，解决了传统技术中嵌合体比例不稳定的问题。同时，基因编辑周期最快可达3个月，大批量获得基因一致的纯合子小鼠成为可能。

## TurboKnockout®技术的验证及流程

经过一系列实验，这项技术的稳定性得到了充分验证，流程包括载体构建、ES打靶、PCR/FACS验证、阳性胚胎制作，以及“100%”嵌合F0胚胎和小鼠的生产与验证。首先，我们构建了Rosa26安全位点过表达载体CAGLuciferaseEGFP质粒，并在C57BL/6NWTES细胞中获得了PCR正确的阳性克隆，随后通过流式细胞仪验证了EGFP的表达情况。

接着，我们利用上述获得的阳性ES克隆，通过显微注射获得阳性创始小鼠，并通过常规传代得到了纯合F2代雄鼠。将F2雄鼠与C57BL/6NWT雌鼠进行配繁，产生可用于TurboKnockout®技术的阳性受体胚胎。通过在该背景胚胎中显微注射C57BL/6NWT的ES细胞，产生125d胚胎及4周龄的创始小鼠，并验证其Luciferase和EGFP的表达情况。测试结果表明，相较于未注射的空扎胚胎，注射C57BL/6NWTES细胞的胚胎有明显的EGFP表达。

## 进一步的成果与结果分析

在4周龄创始小鼠进行活体成像时，结果显示注射了C57BL/6NWTES细胞的胚胎没有Luciferase荧光泄露，而空扎胚胎衍生的小鼠则表现出强烈的Luciferase荧光。此外，通过对注射了WTES细胞的4周龄小鼠及125d胚胎组织进行PCR验证，结果显示F0小鼠的各组织和胚胎中均未检测到MT条带，进一步确认了注射的准确性。

## TurboKnockout®技术的优势

尊龙凯时的TurboKnockout®技术在方面表现出多样化的基因编辑类型，支持基因敲除、敲入、点突变以及人源化的多种项目。此外，这一技术拥有多样化的质量控制(QC)体系，除了常规PCR鉴定外，还可通过染色体核型鉴定、Southern Blot鉴定、qPCR鉴定和FACS鉴定等多种手段确保ES克隆打靶的准确性。该技术结合专利的显微注射技术和四倍体补偿技术，确保交付的所有F0代小鼠基因型一致，基因修饰准确、效果稳定。

## TurboKnockout®基因编辑小鼠模型

基于TurboKnockout®技术，尊龙凯时构建了HUGO-GT®全基因组人源化模型，成功实现鼠源基因的原位替换，为药物临床前研究提供了更接近生物真实机制的模型，同时也可为眼科、神经、肿瘤免疫等领域的研究提供CRO服务。此外，如果您需要全人源抗体小鼠，尊龙凯时的HUGO-Ab®小鼠则携带全套人类免疫球蛋白基因，可在体内产生高亲和力和低免疫原性的全人源抗体。

不论是基因敲除小鼠、条件性基因敲除小鼠，还是基因敲入小鼠，尊龙凯时皆能提供定制服务，为药物筛选、信号通路分析和遗传机制解析提供高效工具，助推生物医学领域的科研创新与突破。